«Нарезка и окрашивание срезов: практическое введение в гистологические методы»

Примечания транскрибатора:

За исключением нижеуказанных исправлений опечаток, текст данной книги сохранен в оригинальном виде: xolol → xylol, side → slide, overstraining → overstaining.

В данной электронной версии черное пунктирное подчеркивание указывает на ссылку на страницу, иллюстрацию или сноску — ссылки также подсвечиваются при наведении на них указателя мыши. Номера страниц указаны на правом поле. Сноски расположены в конце книги.

Там, где это уместно, иллюстрации и сноски расположены рядом с соответствующим текстом.

Текст содержит многочисленные таблицы, которые могут некорректно отображаться на портативных устройствах, а также архаичные символы, которые могут не отображаться вовсе при отсутствии подходящих шрифтов.

НАРЕЗКА СРЕЗОВ И ОКРАШИВАНИЕ. ПРАКТИЧЕСКОЕ ВВЕДЕНИЕ В ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДЛЯ СТУДЕНТОВ И ПРАКТИКОВ

BY

W. S. COLMAN, M.D., M.R.C.P.

ASSISTANT PHYSICIAN (FORMERLY PATHOLOGIST) TO THE NATIONAL

HOSPITAL FOR THE PARALYSED AND EPILEPTIC; AND TO

THE HOSPITAL FOR SICK CHILDREN, GREAT

ORMOND STREET, ETC.

SECOND EDITION

ENLARGED AND IN MOST PART RE-WRITTEN

LONDON

H. K. LEWIS, 136 GOWER STREET, W.C.

1896

PRINTED BY

H. K. LEWIS, 136 GOWER STREET,

LONDON, W.C.

ПРЕДИСЛОВИЕ КО ВТОРОМУ ИЗДАНИЮ.

При подготовке этого издания я стремился удовлетворить потребности студентов и практиков, желающих поддерживать свои навыки в гистологической работе. Были отобраны те методы, которые хорошо зарекомендовали себя на практике, и я счел более правильным подробно описать несколько методов, нежели приводить краткий обзор множества схожих.

Я вновь должен выразить свою признательность различным производителям инструментов за иллюстрации микротомов и т. д.; доктору Фернли из Брэдфорда — за описание его метода инъекции кровеносных сосудов, а компании Macmillan and Co. — за разрешение скопировать рисунки 10 и 11.

У. С. КОЛМАН.

Уимпол-стрит, W. Сентябрь 1896 г.

СОДЕРЖАНИЕ.

CHAPTER I. PAGE Apparatus Required1 CHAPTER II. Hardening Processes15 CHAPTER III. Section Cutting29 CHAPTER IV. Section Mounting55 CHAPTER V. General Staining Methods67 CHAPTER VI. Special Methods for Staining the Nerve Centres87 CHAPTER VII. Special Methods for Staining Micro-Organisms and Blood 103 CHAPTER VIII. Injection of Blood Vessels120 CHAPTER IX. Directions for Preparing Individual Tissues129 Index153

НАРЕЗКА СРЕЗОВ И ОКРАШИВАНИЕ.

ГЛАВА I.

Необходимое оборудование.

Вероятно, нет ничего более озадачивающего для начинающего, чем решение вопроса о том, какое оборудование требуется. Если он заглянет в прейскурант, ему будет трудно определить, какие предметы необходимы, а какие являются либо предметами роскоши, либо требуются только для специальных исследований.

В нижеследующем описании необходимых принадлежностей будут описаны только те, которые полезно всегда иметь под рукой. Их будет достаточно для обычной работы, но для специальных исследований потребуется более сложное оснащение.

Все окрашивающие и другие реагенты следует, насколько это возможно, изготавливать самостоятельно, согласно указаниям, приведенным в последующих главах. Во всяком случае, поначалу это следует делать обязательно, так как полученные таким образом знания окажутся бесценными. Также это позволит значительно сэкономить, если материалы, используемые в больших количествах, такие как метилированный спирт, дистиллированная вода и т. д., закупать галлонами, а не в малых количествах.

Почти все описанные здесь процессы можно выполнять без использования полностью оборудованной лаборатории, фактически — в обычной комнате. Единственная необходимая мебель — это прочный стол, а также шкаф и полки для хранения реагентов.

Также следует приобрести:

Банки или бутыли с плотно прилегающими пробками или крышками для содержания тканей во время фиксации. Они должны быть объемом не менее двух унций. Пустые аптечные бутылочки, которые обычно можно получить у фармацевтов за несколько пенсов, подходят очень хорошо.

Следует также приобрести бутылочки меньшего размера для хранения образцов в спирте после их фиксации до тех пор, пока вы не будете готовы к нарезке срезов. После того как из части образца были сделаны срезы, остальное следует сохранить на случай, если это потребуется для дальнейшего исследования. Каждый образец должен быть снабжен этикеткой с названием или номером, соответствующим записи в блокноте, и тогда в одной банке можно хранить большое количество образцов. Лучший способ маркировки — написать название или номер на кусочке растительного пергамента обычными «маркировочными чернилами» и нагреть его, пока надпись не станет черной. Затем маленькую этикетку следует прикрепить к углу кусочка ткани с помощью стежка или тонкой булавки, и ее можно будет идентифицировать даже спустя годы. Важность четкой маркировки тканей, срезов, предметных стекол и т. д. невозможно переоценить для начинающего. Название, дату и другие подробности следует неизменно записывать на этикетке в момент подготовки. Поначалу студент будет склонен пренебрегать этим, так как он будет легко узнавать свои кусочки ткани и срезы просто по их форме и общему виду. Но по прошествии времени, когда накопятся похожие образцы, ему будет крайне трудно или даже невозможно отличить один от другого.

Некоторое количество бутылей с притертыми пробками объемом 1 и 2 унции для окрашивающих реагентов.

Пробка этих бутылей должна быть снабжена стеклянной палочкой. Это делается путем простого нагревания нижнего конца пробки и верхнего конца стеклянной палочки подходящей длины в пламени горелки до пластичного состояния, а затем их прижимания друг к другу.

Часовые стекла. — По меньшей мере дюжина часовых стекол, в которых можно выполнять операции окрашивания, просветления и т. д. Следует использовать стекла с плоским дном, так как их труднее опрокинуть, чем другие.

Много фильтровальной бумаги.

Следует приобрести как грубую бумагу для использования при изготовлении реагентов, так и небольшие тонкие белые листы (2,5 дюйма) для фильтрации окрашивающих жидкостей непосредственно перед их использованием. Перед применением на них следует капнуть несколько капель спирта или дистиллированной воды, чтобы пропитать бумагу. Это не только позволяет жидкости проходить быстрее, но и предотвращает потерю части жидкости из-за впитывания порами бумаги.

Несколько препаровальных игл в ручках.

Они должны содержаться в чистоте и быть гладкими, и следует следить за тем, чтобы кончик не загнулся.

Большая и маленькая воронки.

Несколько пипеток, состоящих из кусочков стеклянной трубки с внутренним диаметром 1/8 дюйма и длиной около десяти дюймов, вытянутых почти до точки на одном конце.

Расправитель срезов. — Этот инструмент необходим для переноса срезов из одного реагента в другой или из масла гвоздики и т. д. на предметное стекло. Наиболее удобной формой является инструмент Вудхеда, изготовленный из тонкого листового меди, что позволяет изгибать лезвие под любым углом к стержню. Стержень или ручка имеют длину около шести дюймов, и с ними под углом соединено плоское лезвие размером около 3/4 дюйма с закругленными углами. Можно приобрести более крупные инструменты для монтажа срезов большого размера, например, почки, продолговатого мозга и т. д. Поверхность лезвия должна быть ярко отполирована и содержаться в безупречной чистоте.

Обычный анатомический пинцет.

Один или два скальпеля.

Пара тонких ножниц.

Бритва или другой инструмент для нарезки срезов.

Гладкий оселок для поддержания бритв и ножей в надлежащем состоянии заточки.

Спиртовая горелка для подогрева окрашивающих жидкостей.

Несколько пробирок.

Минимальная мерка.

Весы и небольшие гирьки.

Гросс (144 шт.) шлифованных предметных стекол размером 3 x 1 дюйм.

Полгосса шлифованных предметных стекол размером 3 x 1,5 дюйма.

Half an ounce of thinnest coverslips, 7/8 in. diameter.

Quarter of an ounce of thinnest coverslips, 1 1/4 in. diameter.

Микроскоп. — Здесь не место для описания микроскопа как оптического прибора, но некоторые советы по его выбору могут оказаться полезными.

Следует избегать вычурных микроскопов с большим количеством латунных деталей; простота конструкции является большим преимуществом. Микроскоп должен иметь большое тяжелое основание, подковообразное или штативное, достаточно большое, чтобы обеспечить устойчивость при наклоне микроскопа.

Механические предметные столики излишни, они значительно увеличивают стоимость и приносят мало пользы для обычной гистологической работы. Бинокулярные приспособления также малопригодны для этой цели.

Микроскоп должен быть снабжен грубой и тонкой фокусировкой, которые следует очень тщательно проверить перед покупкой прибора. Они должны работать свободно и плавно, и малейший поворот в любом направлении должен немедленно изменять фокус.

Должно быть реверсивное зеркало, одна сторона которого вогнутая, а другая плоская. Обычно используется вогнутая поверхность, плоская поверхность в основном применяется в сочетании с конденсором для исследования микроорганизмов. Должен быть окуляр с умеренным увеличением. Очень мощные окуляры не выявляют дополнительных деталей, а лишь увеличивают изображение, а вместе с ним и любые дефекты, которые могут быть вызваны ошибками в объективе. Окуляров II и IV большинства производителей будет вполне достаточно для большинства требований.

Объективы. — Это самые важные части микроскопа, и студенту будет полезно потратить немного лишних денег, чтобы приобрести хорошие линзы.

Большинство объективов и штативов сейчас изготавливаются с универсальной резьбой, поэтому любой объектив подойдет к любому штативу. Многие исследователи приобретают дешевый штатив, например, поставляемый компанией Leitz, а затем оснащают его линзами Zeiss или другого первоклассного производителя.

Наиболее полезными линзами являются 1-дюймовая линза малого увеличения и 1/5-дюймовая или 1/6-дюймовая линза большого увеличения, или № 3 и № 7 континентальных производителей, или A и D компании Zeiss. Линза 1/2 дюйма также окажется очень полезной.

Для детальной работы, такой как бактериология и исследования крови, потребуются более сильные увеличения — иммерсионные линзы 1/8 или 1/12. Эти объективы подходят чрезвычайно близко к объекту, и должны использоваться очень тонкие покровные стекла. Чтобы избежать преломления, вызванного прохождением лучей через воздух между покровным стеклом и линзой, между ними помещается иммерсионная жидкость. С некоторыми линзами используется вода, но обычно применяется масло, имеющее тот же показатель преломления, что и стекло, и наиболее часто используемым является кедровое масло (Zeiss предпочитает масло из вида Juniperus virginiana). Капля масла помещается палочкой прямо над исследуемым объектом, и объектив осторожно опускается с помощью грубой фокусировки, пока не придет в контакт с каплей масла. Фокусировку затем следует выполнять только с помощью тонкой настройки.

Когда срез исследован, масло необходимо удалить с линзы. Для этой цели можно использовать мягкий шелковый платок или специальный кусочек замши, действуя очень осторожно. Если все масло удалить не удается, платок можно смочить небольшим количеством абсолютного спирта и быстро протереть линзу. Спирт нельзя оставлять в контакте с линзой, так как он является растворителем канадского бальзама, которым линзы часто закрепляются на месте.

Рис. 1. — Двойной или тройной револьвер.

Двойной или тройной револьвер (рис. 1). — Это механическое приспособление размещается на нижнем конце тубуса. К нему крепятся два или три объектива с разным увеличением. Револьвер вращается вокруг центральной оси таким образом, что объективы могут последовательно точно устанавливаться в положение над объектом на предметном столике. Поэтому замена объектива с большим увеличением на объектив с малым увеличением и наоборот занимает мгновение. Это чрезвычайно удобное приспособление, экономящее время, и его использование позволяет избежать риска уронить и повредить объективы при частом их привинчивании и отвинчивании. Те, чьи микроскопы еще не оснащены этим приспособлением, могут легко установить его за стоимость около одного фунта стерлингов.

Конденсор. — Этот механизм для концентрации света на объекте является необходимостью для бактериологической работы. Наиболее удобной формой является осветительный аппарат Аббе (рис. 2).

Он состоит из системы короткофокусных линз, которые собирают свет, полученный от зеркала, и направляют его на объект. Количество света, получаемого от зеркала, регулируется «ирисовой диафрагмой», апертуру которой можно расширять или сужать, перемещая небольшой рычаг сбоку. Его можно установить на большинство штативов микроскопов, но лучше изначально приобрести штатив, сконструированный для его установки.

Стоимость микроскопа варьируется от двух гиней до двухсот. На рынке много отличных микроскопов, и из них можно упомянуть несколько, которые, по мнению автора, работают удовлетворительно.

Рис. 2. — Осветительный аппарат Аббе.

Из более дешевых студенческих микроскопов «Star», производимый Messrs. R. and J. Beck из Корнхилла, E.C., окажется надежным вложением средств. Его можно приобрести с грубой и тонкой фокусировкой, револьвером и 1-дюймовым и 1/4-дюймовым объективами примерно за 5 фунтов стерлингов. Те, кому нужен лучший инструмент, найдут, что микроскоп Beck «Pathological», оснащенный револьвером, осветителем Аббе и т. д. за 16 фунтов стерлингов, отвечает всем требованиям.

Leitz из Йены поставляет два хороших и дешевых микроскопа за 3 фунта 10 шиллингов и 5 фунтов стерлингов. Однако они не отличаются неизменным качеством, и их следует тщательно протестировать у компетентного эксперта до завершения покупки. Иммерсионные линзы Leitz дешевы и часто чрезвычайно хороши, но их следует заранее тщательно проверять, так как их качество не совсем однородно. Микроскопы можно приобрести у Mr. A. Frazer, Teviot Place, Эдинбург.

«Бактериологический» микроскоп, изготовленный Messrs. Swift с Тоттенхэм-Корт-роуд, — это прибор, которым никто не может быть разочарован. Он продается с конденсором Аббе, тройным револьвером, 1/6-дюймовым и 1/12-дюймовым иммерсионным объективом чуть менее чем за 20 фунтов стерлингов. И штатив, и линзы выполнены в первоклассном стиле Swift, и те, кто может позволить себе первоначальные затраты, не пожалеют об этом. Либо можно приобрести штатив, а объективы и аксессуары добавлять по отдельности со временем.

Среди континентальных производителей отличные микроскопы для гистологической работы выпускаются многими фирмами. Линзы Zeiss заслуженно пользуются высокой репутацией, так как ни одна бракованная линза Zeiss никогда не покидает завод, а их оптические свойства почти совершенны. Однако за эту гарантию покупателю приходится платить несколько более высокую цену, но деньги вложены не зря. Агентство Zeiss находится по адресу: 29 Margaret Street, Regent Street, W.

Reichert из Вены продает микроскопы и линзы, которые смоделированы по образцу Zeiss, и, хотя они дешевле, часто равны им по качеству, но качество не совсем однородно. Его инструменты можно приобрести через любого оптика, но его агентом в этой стране является Mr. A. Frazer, Teviot Place, Эдинбург.

Перед покупкой микроскопа студент должен получить иллюстрированный прейскурант от любой из вышеупомянутых фирм и, выбрав инструмент, должен очень тщательно протестировать его, или, что еще лучше, попросить опытного друга протестировать его для него, прежде чем решиться на покупку. Следует использовать деликатные тестовые объекты, такие как диатомовые водоросли, чешуйки крыльев бабочки или окрашенный препарат микроорганизмов. Следует опробовать грубую и тонкую фокусировку. Они должны работать свободно, плавно и без задержек. Четкость линзы должна быть проверена на упомянутых мелких объектах. Поле зрения должно быть совершенно плоским, т. е. каждая часть должна быть в фокусе одновременно, четкость должна быть идеально острой и точной, а тестовые объекты — без двойного контура. Поле зрения должно быть полностью свободно от призматических цветов. Если вокруг объектов есть цветной ореол, это указывает на дефект оптических свойств объектива, и следует выбрать другой.

С микроскопом всегда нужно обращаться с величайшей осторожностью. Удары и падения имеют тенденцию слегка ослаблять и смещать линзы, а также навсегда ухудшать его оптические свойства. Пыль должна быть максимально тщательно исключена. Лучше всего это достигается хранением инструмента под стеклянным колпаком, когда он не используется. Линзы следует протирать как можно реже, а когда это необходимо, следует использовать очень мягкую замшу. Микроскоп должен храниться в сухой комнате, иначе латунные детали вскоре потускнеют, а стальные части будут склонны к ржавлению.

ГЛАВА II.

Процессы фиксации.

Для удовлетворительного исследования тканей необходимо, чтобы они были «зафиксированы» в определенных жидкостях. Цель этого — придать образцам большую консистенцию, чтобы можно было легче получать тонкие срезы и безопаснее с ними манипулировать, а также «зафиксировать» элементы ткани, насколько это возможно, в том же относительном положении, что и в живом организме. Процесс фиксации также воздействует на протоплазму клеток и предотвращает их набухание при помещении в воду и в различные окрашивающие жидкости.

Используемая жидкость должна быть такой, которая сама по себе не повредит образец и которую можно полностью удалить промыванием, чтобы она не мешала операциям окрашивания. Во время фиксации образцы следует хранить в широкогорлых бутылях, на дно которых положено немного ваты или пакли. Это позволяет фиксирующей жидкости свободно контактировать с нижней поверхностью кусочков ткани и предотвращает их прилипание к твердому стеклянному дну.

Фиксирующую жидкость необходимо периодически менять. Это всегда следует делать по истечении двадцати четырех часов, чтобы избавиться от любого осадка крови и т. д., который мог накопиться. Кроме того, ткань при помещении в жидкость содержала много воды, которая разбавила ее, и, следовательно, желательна ранняя замена. В дальнейшем жидкость требует замены только по мере того, как она становится мутной или появляется осадок, обычно примерно раз в неделю.

Во время фиксации образцы следует хранить в прохладном месте, так как тепло способствует изменениям в клетках и т. д.

При манипуляциях с частями органов всегда следует использовать пинцет, причем с большой осторожностью. Образцы никогда не следует протыкать иглами, иначе при исследовании среза под микроскопом появятся неприглядные отверстия, которые можно даже принять за патологические проявления.

Требуется некоторая практика, чтобы понять, когда ткань достаточно зафиксирована. Цель состоит в том, чтобы сделать их не по-настоящему твердыми, а жесткими. Почти излишне добавлять, что при проверке этого пальцами необходимо соблюдать величайшую осторожность, иначе ткани может быть нанесен серьезный ущерб.

Когда ткань достаточно зафиксирована, фиксирующую жидкость необходимо тщательно удалить. Быстрее всего это достигается путем помещения образца в емкость, в которую постоянно течет холодная вода из-под крана. Затем ткань можно извлечь (всегда используя пинцет и никогда не используя иглу) и поместить в среду для заливки, как указано далее; или, если ее не собираются резать сразу, в равные части метилированного спирта и воды, в которых она может храниться неопределенно долго, при этом жидкость следует менять, если она становится хоть сколько-нибудь мутной.

Для обычной работы нет необходимости иметь более чем следующие фиксирующие жидкости: — Жидкость Мюллера: —

Potassium Bichromate2 1/4grms. 3 1/2drachms. Sodium Sulphate1grm.1 1/2drachms. Water to 100c.c.1pint.

Иногда к каждой пинте жидкости добавляют две драхмы карболовой кислоты, но, как правило, это не требуется.

Жидкость Мюллера является наиболее полезной из различных используемых жидкостей по следующим причинам: —

1. Она вызывает очень незначительную усадку элементов ткани, и поэтому может использоваться для самых деликатных объектов, например, сетчатки и эмбрионов.

2. Вследствие того, что она не вызывает усадки тканей, она не выжимает кровь из сосудов, и там, где орган был переполнен кровью до смерти, мы можем, используя жидкость Мюллера, сохранить естественную инъекцию капилляров.

3. Существует сравнительно небольшая опасность перефиксации ткани и придания ей хрупкости.

4. Срезы органов, зафиксированных в жидкости Мюллера, обычно прочные и с ними легко работать. Они не стремятся скручиваться или прилипать друг к другу так сильно, как те, что зафиксированы в спирте.

5. Она легко проникает в ткани, и поэтому в ней можно удовлетворительно фиксировать большие части органов или даже весь орган целиком.

6. Она очень дешева. Галлон можно приготовить примерно за восемь пенсов.

Однако у жидкости есть некоторые незначительные недостатки: —

1. Процесс фиксации медленный, занимающий от четырех до восьми недель.

2. Жидкость придает ткани стойкий тусклый цвет. Это не вызывает никаких неудобств для микроскопических целей, но является недостатком, когда предполагается сохранить остальную часть образца в качестве макропрепарата. В таких случаях орган следует фиксировать в спирте, карболовой кислоте или формалине.

Жидкость Мюллера можно использовать практически для любой ткани. Она особенно полезна для тех, которые содержат большое количество жидкости или крови, и необходима для нервных тканей, которые предполагается окрашивать по методу Паля (стр. 89).

Для фиксации образца в ней необходимо использовать объем жидкости, по крайней мере в двадцать раз превышающий объем образца.

Жидкость необходимо менять на третий день, а затем примерно каждую неделю, по мере необходимости.

Метилированный спирт — очень полезный фиксирующий агент. Он фиксирует за одну-три недели в зависимости от размера ткани и количества используемого спирта. Его недостатки: —

1. Он более склонен к перефиксации, чем жидкость Мюллера.

2. Он вызывает сильную усадку ткани и, таким образом, выжимает много крови из сосудов.

Он наиболее полезен при фиксации тканей, содержащих много эпителия, например, почки, эпителиомы и т. д.

Спирт также часто используется для завершения фиксации жидкостью Мюллера и для сохранения тканей после того, как они были зафиксированы.

Следует использовать объем спирта примерно в десять или пятнадцать раз больше объема тканей. Жидкость следует менять на третий день, а затем по мере необходимости.

Жидкость Мюллера и спирт. — Это полезная комбинация для многих целей. Она готовится так: — жидкость Мюллера, три части; метилированный спирт, одна часть.

Жидкости после смешивания перед использованием нужно дать остыть, и при необходимости отфильтровать. Она удовлетворительно фиксирует образцы за три недели.

Жидкость Мюллера и формалин. — Чрезвычайно полезная смесь, приготовленная путем добавления одной части формалина к девяти частям жидкости Мюллера. Она фиксирует за гораздо более короткое время, чем жидкость Мюллера, и вызывает очень незначительную усадку.

Абсолютный спирт. — Используется как фиксирующий агент, когда ткани должны быть исследованы на наличие микроорганизмов, и для образцов, которые будут окрашены по методу Ниссля (стр. 101). Более дешевая и столь же эффективная фиксирующая среда изготавливается путем обезвоживания метилированного спирта добавлением одной унции плавленого карбоната калия на каждую пинту метилированного спирта с последующим декантированием.

Необходимо использовать маленькие кусочки. Глубина блока не должна превышать 3/8 дюйма. Жидкость следует менять на третий день. Фиксация будет завершена примерно через десять дней или даже раньше.

Осмия кислота. — По быстроте действия и для быстрой фиксации всех элементов ткани в их естественном положении осмия кислота является одним из лучших фиксирующих реагентов, которыми мы располагаем.

Ее недостатки как фиксирующего агента: —

1. Ее стоимость.

2. Ее раздражающие и коррозийные пары.

3. Тот факт, что в ней можно фиксировать только маленькие кусочки ткани, так как внешняя поверхность фиксируется очень быстро, и тем самым жидкость не может проникнуть в центр куска.

Чаще всего она используется как фиксирующий агент для очень деликатных структур, таких как сетчатка или эмбрионы, или для свежих срезов мозга (стр. 95).

Саму кислоту можно приобрести в запаянных ампулах, каждая из которых содержит один грамм. Их следует разбивать в бутылке с достаточным количеством дистиллированной воды для приготовления однопроцентного раствора. Бутылку, содержащую его, следует накрыть коричневой бумагой, чтобы исключить свет. Для целей фиксации маленькие кусочки ткани, не намного больше горошины, следует поместить в кислоту, разбавив однопроцентный раствор пятью-десятью объемами дистиллированной воды. Ткани можно оставить в этом растворе на срок от трех до пяти дней. Затем их необходимо тщательно промыть в дистиллированной воде, после чего их можно хранить в метилированном спирте.

Как фиксацию, так и последующее промывание необходимо проводить в темноте.

Осмия кислота также является ценнейшим окрашивающим реагентом (см. стр. 81).

Карболовая кислота (5%). — Может использоваться для фиксации практически любой ткани, но особенно полезна для фиксации нервных тканей, таких как мозг или спинной мозг, которые впоследствии будут сохранены в качестве музейных экспонатов. Она не обесцвечивает образец так быстро, как спирт.

Следует использовать объем жидкости в три или четыре раза больше объема образца. Она требует замены по истечении двадцати четырех часов и снова по истечении первой недели.

Насыщенный водный раствор сулемы — один из наиболее удобных фиксирующих реагентов для маленьких кусочков деликатной ткани, например, эмбрионов. Он фиксирует их за несколько дней. Когда они достаточно зафиксированы, ртутную соль следует удалить, промыв сначала в метилированном спирте в течение нескольких часов, а затем в проточной воде.

Формалин. — Водный раствор, содержащий около 35% формальдегида. Это быстрый фиксирующий агент, вызывающий очень незначительную усадку тканей и не обесцвечивающий образцы так сильно, как спирт. Для фиксации формалин следует использовать в виде двух-пятипроцентного раствора в дистиллированной воде. Его также можно использовать в виде десятипроцентного раствора для монтажа музейных препаратов, но через некоторое время на стекле может образоваться мутный осадок. Это наиболее подходящий фиксирующий агент, имеющийся в нашем распоряжении для глаз. Он быстро фиксирует элементы ткани, но не вызывает сильного сокращения. Его также можно использовать для фиксации мозга и спинного мозга. Для последней цели необходимо использовать большие количества жидкости, и ее нужно часто менять. Как только они достаточно зафиксированы, их следует перенести в метилированный спирт.

Жидкость Марки. — Она состоит из: —

Müller’s fluid 2parts. Osmic acid solution (one per cent.)1part.

Она используется для фиксации образцов в качестве предварительного этапа к методу Гольджи для окрашивания нервных клеток (стр. 97), а также для завершения фиксации срезов спинного мозга и т. д. перед применением модификации Шефера гематоксилинового метода Вейгерта-Паля (стр. 91).

Она также используется в качестве красителя для недавно дегенерировавших нервных трактов и волокон, особенно после экспериментальных поражений.

Жидкость обладает слабой проникающей способностью, поэтому ткани необходимо нарезать на маленькие кусочки, размером около 3/8 дюйма. Нет необходимости помещать их в эту жидкость сразу после извлечения из организма, но предварительная фиксация должна проводиться в жидкости Мюллера, а не в спирте и т. д.

Специальные фиксирующие реагенты для быстрой фиксации с целью изучения клеточной структуры.

1. Спирт.

2. Раствор Флемминга (модифицированный Фридманом): —

Osmic acid (one per cent.)3c.c.(♏xxx.). Glacial acetic acid2c.c.(♏xx.). Chromic acid (one per cent.) 42c.c.(℥j.)

Маленькие кусочки следует фиксировать в этой жидкости от двенадцати до двадцати четырех часов, а затем промыть и перенести в спирт на несколько дней перед окрашиванием.

3. Азотная кислота. — Десятипроцентный раствор в дистиллированной воде. Он фиксирует ткань за три-четыре часа, после чего следует использовать 70-процентный спирт, а фиксацию завершать в абсолютном спирте.

При использовании любого из этих методов необходимо, чтобы ткань была извлечена из организма при жизни или сразу после смерти. Они применяются для выявления изменений в клетках и их ядрах в быстрорастущей или воспаленной ткани, для изучения кариокинеза в раковых клетках и исследования внешнего вида нервных и железистых клеток в состоянии покоя, при активной работе и при утомлении; они также очень полезны при подготовке препаратов «паразитарных телец», которые были описаны во многих раковых клетках.

Декальцинирующие жидкости.

Используются при подготовке костей, зубов, костных опухолей и т. д. Две лучшие жидкости для общего использования: —

Хромово-азотная жидкость. — Она изготавливается следующим образом: —

Chromic acid1gramme 45grains. Nitric acid2grammes1 1/2drachms. Water 200c.c.1pint.

Если кость не очень плотная, жидкость можно использовать, разбавив равным количеством воды. Следует использовать большое количество жидкости, и, как и все декальцинирующие жидкости, ее следует часто менять.

Как только образец станет достаточно гибким, его следует тщательно промыть в проточной воде в течение нескольких часов, а затем перенести в спирт до тех пор, пока не будет удобно нарезать срезы.

Раствор фон Эбнера: —

Hydrochloric acid1gramme 1 1/2drachms. Common salt10grammes2ounces. Water to 100c.c.1pint.

Это очень полезный декальцинирующий агент, но он заставляет волокнистые элементы набухать несколько сильнее, чем хромово-азотная жидкость. Необходимо использовать большое количество жидкости, и ее следует менять ежедневно. После завершения декальцинации ее необходимо очень тщательно вымыть в проточной воде.

Отбеливающий раствор (eau de Javelle).

(1)“Chloride of lime” (bleaching powder)20 1/2oz. Water 100 2 1/2oz.

Хорошо взболтать.

(2)Carbonate of potassium20 1/2oz. Water 100 2 1/2oz.

Смешайте два раствора. Дайте им постоять час и отфильтруйте.

Он используется в основном для просветления растительных срезов, но может также использоваться для срезов, содержащих большое количество пигмента. Он особенно полезен при обесцвечивании срезов «мадурской стопы», вызванной присутствием черного грибка.

ГЛАВА III.

Нарезка срезов.

Заливка срезов. — Перед тем как делать срезы, ткани необходимо залить в какую-либо среду, которая проникнет в их промежутки и способна стать твердой, чтобы поддерживать самые деликатные части, когда нож проходит через ткань.

Наиболее полезными веществами являются: —

(1) гуммиарабик, (2) целлоидин, (3) парафин или воск.

Гуммиарабик. — Отборный бесцветный гуммиарабик 2 части, холодная вода 3 части.

Оставьте при частом помешивании до растворения. Добавьте десять капель карболовой кислоты на каждую унцию муцилажа.

Образцы тщательно освобождаются от всех следов фиксирующей жидкости путем промывания в воде, а затем ткань помещается в раствор гуммиарабика по крайней мере на двенадцать часов, или, если добавлено достаточно карболовой кислоты, ее можно оставить там на неопределенное время.

При замораживании гуммиарабик образует твердую некристаллическую массу, которая поддерживает ткань со всех сторон. Его нельзя замораживать слишком сильно, иначе он становится твердым и довольно хрупким и может повредить бритву. Если это произошло, поверхность можно достаточно размягчить, осторожно подышав на нее.

После нарезки в гуммиарабике срезы осторожно переносятся с ножа в дистиллированную воду с помощью мягкой кисточки из верблюжьей шерсти и оставляются там на час или два, пока среда полностью не растворится. Затем их можно окрасить и смонтировать, или их можно отложить в спирт на неопределенное время, а затем окрасить и смонтировать.

Целлоидин для многих целей является почти идеальной средой для заливки. (1) Он обладает большой проникающей способностью; (2) ему можно придать превосходную консистенцию для нарезки; (3) после того как срезы сделаны, он позволяет свободно манипулировать ими, не опасаясь их повредить; (4) будучи совершенно прозрачным и однородным в тонких срезах, его не нужно удалять со среза перед монтажом. Он нерастворим в воде и в слабом спирте; слабо растворим в спирте крепостью более 90% и очень легко растворим в эфире или в смеси спирта и эфира. Последний растворитель является наиболее часто используемым.

Раствор для заливки готовится так: —

Возьмите немного чистого целлоидина («Schering’s», продается в коробках, содержащих унцию стружки, очень хорош) и залейте его примерно восьмикратным объемом смеси равных частей абсолютного спирта и эфира. Дайте постоять всю ночь, пока целлоидин не растворится. Раствор должен быть примерно консистенции обычного муцилажа.

Также удобно иметь более жидкий раствор, приготовленный с использованием двойной пропорции спирта и эфира. Оба раствора следует хранить в широкогорлых бутылях с притертыми пробками, а пробку следует хорошо смазать вазелином в качестве дополнительного препятствия для испарения летучего эфира.

Перед заливкой образца необходимо тщательно обезвоживать его в течение двенадцати-двадцати четырех часов в абсолютном спирте. Затем его следует поместить в смесь, содержащую спирт и эфир, на час или два, а после этого перенести в жидкий раствор целлоидина на двадцать четыре часа, а затем в густой раствор на такой же период. Целлоидин проникает медленно, и в случае нервных тканей и других деликатных структур разумно дать полное время для различных этапов. Когда ткань была тщательно пропитана целлоидином, ее осторожно извлекают из целлоидина и помещают в нужное положение на кусочек пробки подходящего размера для зажима в держателе микротома. Целлоидин наносится вокруг объекта, чтобы он поддерживался со всех сторон. Затем его оставляют на воздухе, пока поверхность не станет твердой, после чего пробку помещают тканью вниз в метилированный спирт. Пробка плавает, но ткань и целлоидин остаются погруженными. По истечении двадцати четырех часов целлоидин станет полупрозрачным и опалесцирующим, и такой же консистенции, как сваренный вкрутую яичный белок. Когда невозможно ждать так долго, быструю фиксацию целлоидина можно обеспечить путем погружения его в метилированный хлороформ вместо спирта, но более медленный метод дает более стабильно удовлетворительные результаты.

Кусочки ткани, залитые в целлоидин, также можно резать на замораживающем микротоме. После того как целлоидин станет твердым в результате погружения в метилированный спирт, ткань с целлоидином вокруг нее можно срезать с пробки, промыть в воде для удаления спирта, а затем выдержать час или два в гуммиарабике, поместить на пластину эфирного микротома, заморозить и нарезать обычным способом.

Последующие операции окрашивания проводятся так же, как и для срезов, сделанных вручную или в гуммиарабике. Поскольку целлоидин лишь слегка окрашивается гематоксилином, квасцовым кармином, бура-кармином и т. д., нет необходимости удалять его со срезов, но он проявляет столь интенсивную реакцию окрашивания с анилиновыми красителями, что его необходимо удалять обработкой спиртом и эфиром либо до, либо после операции окрашивания.

Срезы после окрашивания можно монтировать в растворе Фарранта (стр. 59) или в канадском бальзаме (стр. 61). Если используется последняя среда, срез следует просветлить после обезвоживания в спирте с помощью масла бергамота или масла душицы вместо масла гвоздики, так как последнее растворяет целлоидин и заставляет срез разрушаться.

Целлоидин наиболее полезен для нарезки срезов оболочек глаза, внутреннего уха и костного мозга. Его всегда следует использовать для гематоксилинового метода Вейгерта-Паля при окрашивании нервных центров, так как он защищает срез от повреждения при переносе из одной жидкости в другую, что неоднократно требуется в процессе. Краситель полностью вымывается из целлоидина используемым обесцвечивающим раствором (стр. 90).

Парафин. — Парафин — очень удобная среда для заливки деликатных структур, так как можно получить очень тонкие срезы, и парафин не нужно удалять со среза, пока последний не окажется надежно закрепленным на предметном стекле. Он непригоден для больших срезов. Операции окрашивания нелегко выполнять после нарезки в парафине, и лучше окрашивать блоки ткани целиком перед заливкой. Лучшими красителями для проникновения являются бура-кармин (стр. 75), квасцовый кармин (стр. 76) и гематоксилин Клейненберга (стр. 70). Ткань должна оставаться в них от четырех до десяти дней.

Используются различные виды парафина. Обычно держат два вида: один «мягкий», плавящийся при 110° F, и другой «твердый», плавящийся при 140° F. Смесь двух частей твердого и одной части мягкого окажется наиболее полезной. Зимой может потребоваться большая доля мягкого сорта, а в жаркую погоду — большая доля твердого. Парафиновую массу, которая всегда доступна, недавно предложил доктор Ф. Э. Баттен, который использует обычную белую свечу, состоящую из парафина и воска. Если масса оказывается слишком твердой, ей легко можно придать подходящую консистенцию, добавив немного парафина с низкой температурой плавления.

Чтобы подготовить кусочек ткани для заливки в парафин, его следует окрасить, промыть в дистиллированной воде и удалить как можно больше влаги с помощью промокательной бумаги. Затем блок обезвоживают, сначала в метилированном спирте в течение нескольких часов, наконец в абсолютном спирте. Его осторожно берут пинцетом из спирта и помещают в ксилол на час или два в зависимости от размера. Излишки ксилола удаляются с поверхности, и ткань помещается в расплавленный парафин. Он сразу застынет вокруг холодной ткани, но вскоре снова расплавится, и его необходимо поддерживать при температуре чуть выше точки плавления в течение одного-четырех часов, в зависимости от размера. Затем ткань переносят в форму (которую легко сделать из бумаги), размером около половины дюйма, и заливают расплавленным парафином, пока форма не заполнится. Форму можно сделать, сложив кусочек бумаги в коробочку размером около половины дюйма, или можно использовать маленькую коробочку из-под таблеток. Другой удобный метод — поместить два L-образных кусочка свинца в контакт друг с другом так, чтобы они ограничивали пространство подходящего размера, как на диаграмме (рис. 3). Ткань теперь герметично запечатана и может храниться неопределенно долго, если ее неудобно резать в данный момент. Чтобы подготовить ее к нарезке, весь лишний парафин обрезают теплым ножом, а блок закрепляют на кусочке дерева, вырезанном так, чтобы он подходил к зажиму микротома, расплавив нижний конец парафинового блока горячей иглой или проволокой и прижав его к дереву.

Рис. 3.

Когда срезы нарезаны, их можно переносить по одному на предметное стекло (которое следует заранее слегка смазать насыщенным раствором целлоидина в масле гвоздики), или их можно нарезать так, чтобы задняя сторона одного среза парафинового блока прилипала к передней стороне следующего, и таким образом получается непрерывная тонкая лента серийных срезов. Ленту разбивают на отрезки длиной около двух с половиной дюймов и переносят на предметное стекло, на котором можно разместить несколько лент рядом, и таким образом сохранить большое количество срезов в том порядке, в котором они были нарезаны. На предметном стекле следует сделать отметку, указывающую, где начинается серия, и каждое стекло должно быть пронумеровано, чтобы можно было сразу определить точное положение каждого среза в серии.

Перед монтажом парафин необходимо удалить со срезов. Это легко сделать на предметном стекле в случае отдельных срезов и лент. Если срезы скручены, небольшое тепло заставит их распрямиться и лечь плоско. Стекло подогревают над спиртовой горелкой, пока парафин не расплавится. Срезы сохранят свое место благодаря целлоидину под ними. Затем ксилолу дают стечь по стеклу из пипетки, пока парафин не будет полностью растворен, что можно определить, взглянув на срезы под малым увеличением микроскопа. Стекло помещают в почти вертикальное положение, чтобы дать ксилолу стечь, излишки вытирают с края стекла промокательной бумагой, на стекло наносят каплю раствора канадского бальзама (стр. 61) и накладывают покровное стекло подходящего размера.

Микротомы. — После длительной практики лица, обладающие достаточной ловкостью рук, могут приобрести навык, позволяющий изготавливать вполне удовлетворительные срезы образцов, залитых в парафин и т. д., вручную. В патологической лаборатории одного крупного немецкого университета еще совсем недавно использование микротома было запрещено профессором, который сам является выдающимся гистологом. Количество времени, затрачиваемого на приобретение необходимого навыка, а также дешевизна и большое удобство современных микротомов привели к тому, что ручная нарезка отошла на второй план, и в настоящее время повсеместно приняты те или иные формы микротомов.

Рис. 4. — Эфирный микротом Кэткарта.

A, B. Деревянная рама и опоры. C. Стеклянные направляющие. G. Винт для подъема цинковой пластины H. J. Флакон с эфиром. L. Трубка от воздушных мехов.

На рынке представлено огромное количество таких приборов, каждый из которых обладает особыми преимуществами и зачастую особыми недостатками. Будут описаны лишь некоторые из наиболее часто используемых. Существуют микротомы для нарезки в гуммиарабике, замороженном эфирным спреем или льдом, а также предназначенные для нарезки в парафине или целлоидине.

Эфирный микротом Кэткарта (рис. 4). — Этот прибор или его более поздние модификации (см. далее) являются, пожалуй, наиболее полезным и экономичным микротомом для нужд студента. Его первоначальная стоимость невелика, он компактен и портативен, а также прост и недорог в эксплуатации.

Он состоит из дубовой рамы, которая может быть прочно закреплена на столе. На этой раме расположены две узкие параллельные опоры высотой около двух дюймов, покрытые полосками листового стекла и служащие гладкими направляющими, по которым скользит бритва при изготовлении срезов. Между ними находится латунный колодец, в котором прочно закреплена в горизонтальном положении цинковая пластина, находящаяся почти на уровне стеклянных направляющих. Она может подниматься или опускаться примерно на 3/8 дюйма с помощью винта с очень мелкой и точной резьбой. Этот винт приводится в движение большим рифленым колесом под микротомом. Прямо под цинковой пластиной расположены две небольшие трубки: одна соединена с резиновыми мехами, другая — с флаконом сбоку, содержащим эфир. Когда воздух выходит из первой трубки, он проходит над открытым концом второй, тем самым вытягивая эфир и заставляя его распыляться на цинковую пластину, одновременно вызывая его быстрое испарение, что снижает температуру цинковой пластины.

При нарезке срезов на этом микротоме ткань извлекают из гуммиарабика и помещают на цинковую пластину. Затем работают мехами до тех пор, пока гуммиарабик на цинковой пластине полностью не замерзнет. Пластину следует опустить с помощью винта так, чтобы поверхность кусочка ткани оказалась на уровне стеклянных направляющих. Их, как и бритву, следует смочить водой. Бритву, крепко удерживаемую в руке, продвигают вдоль стеклянных направляющих в довольно косом направлении. Затем пластину следует поднять, повернув винт внизу на очень малый угол, снять еще один срез и так далее. Срезы осторожно переносят с бритвы в сосуд с водой с помощью мягкой влажной кисточки из верблюжьего волоса. Иглу для этой цели использовать не следует.

Если образец очень нежный и может испортиться от скручивания на ноже, последний следует охлаждать, часто погружая его в сосуд с кусочками льда в воде. Тогда гуммиарабик останется замороженным после нарезки и будет лучше поддерживать ткань. Каждый срез следует немедленно переносить с ножа на предметное стекло, смывая его струей ледяной воды из пипетки.

В качестве ножа можно использовать обычную бритву с прямо заточенным лезвием. Ее необходимо крепко держать обеими руками. Поскольку это довольно неудобно, доктор Шеридан Делепин предложил использовать обычный нож от столярного рубанка. Для него требуется только одна рука, а другая может оставаться на головке винта внизу, чтобы поднимать пластину сразу после каждого движения ножа. Его недостатки заключаются в том, что он довольно тяжел для длительной работы и его труднее «править», чем бритву.

А. Фрейзер недавно представил ценное усовершенствование микротома Кэткарта (рис. 5).

В нем латунная рама, несущая цинковую пластину и трубки эфирного спрея, окружена латунным цилиндром, в который она точно входит и поднимается по мере необходимости при вращении винта под прибором. Эта латунная рама, а вместе с ней и цинковая пластина и т. д., могут быть легко извлечены из внешней трубки и заменены вторым латунным колодцем, который точно подходит на свое место и может подниматься винтом по мере необходимости. В нем находится небольшой зубчатый зажим, который можно затянуть, чтобы удерживать деревянный брусок с кусочком ткани, залитой в парафин. С помощью этого прибора можно также делать срезы из целлоидина, но поскольку косые движения ножом выполнить невозможно, получить очень тонкие срезы не удастся. Комбинированный микротом можно приобрести за гинею у Фрейзера, 22 Teviot Row, Эдинбург.

Рис. 5. — Модификация микротома Кэткарта по Фрейзеру.

A. Микротом, подготовленный для эфирного спрея. B. Цилиндр с зажимом для фиксации объекта, залитого в целлоидин и т. д., для замены аппарата эфирного спрея.

Существует еще одна модификация, которая более универсальна и в то же время дороже оригинальной модели. В ней вместо стеклянных направляющих для поддержки ножа используется плоская стеклянная пластина размером около восьми дюймов, достаточно большая, чтобы можно было использовать «плуг Свифта» (рис. 6) для нарезки срезов. Этот инструмент состоит из треугольной латунной рамы, опирающейся на три ножки, каждая из которых представляет собой винт с наконечником из слоновой кости. Один винт находится спереди, два — сзади. Под пластиной, удерживаемая на месте передними винтами и небольшим зажимом сзади, находится бритва лезвием вперед. Лезвие можно поднимать или опускать, вращая передний винт, на который опирается рама. Перед нарезкой срезов лезвие бритвы следует опустить до уровня ткани, следя за тем, чтобы все ножки были одинаковой длины. Плуг следует крепко взять обеими руками (указательный палец одной руки остается свободным для вращения переднего винта) и продвинуть довольно косо через ткань. Затем лезвие бритвы слегка опускают, поворачивая винт на очень малый угол, делают еще один срез и так далее. При небольшой практике можно очень быстро получать очень тонкие равномерные срезы.

Еще один полезный эфирный микротом — это микротом производства Юнга из Гейдельберга. Нож вращается вокруг оси, и имеется остроумное храповое устройство, которое работает синхронно с каждым взмахом ножа, автоматически поднимая ткань на необходимое расстояние для следующего среза. Точную толщину срезов можно регулировать с большой точностью с помощью простого приспособления. Инструмент можно приобрести в этой стране примерно за 2 фунта стерлингов. Он работает удовлетворительно, но при наличии практики студент получит столь же хорошие результаты с более дешевым «Кэткартом».

Микротом для замораживания льдом Уильямса (рис. 6).

Он состоит из круглого водонепроницаемого ящика из красного дерева, снабженного выходной трубкой внизу и покрытого прочной крышкой из листового стекла. В центре дна ящика прочно закреплена толстая латунная стойка, увенчанная латунным диском, который входит в отверстие в центре стеклянной крышки так, что его поверхность находится на одном уровне с поверхностью крышки.

Рис. 6. — Микротом для замораживания льдом Уильямса с плугом Свифта.

Для использования ящик заполняют чередующимися слоями толченого льда и соли; затем надевают крышку и закрепляют ее с помощью бокового винта. Ткань, подлежащую замораживанию, осторожно извлекают из гуммиарабика, помещают на латунный диск и обильно обмазывают гуммиарабиком вокруг. Затем ее следует накрыть оловянным колпачком на несколько минут до замерзания. Срезы изготавливаются с помощью плуга Свифта (стр. 44).

Рис. 7. — Микротом Шанце (см. текст).

Микротом Шанце (рис. 7) — это модель, используемая в лабораториях Лейпцига. Он состоит из тяжелой железной рамы с большим основанием. Нож закреплен в зажиме, который скользит по всей длине инструмента, перемещаясь по двум гладким железным пластинам, расположенным под углом друг к другу. Нож нужно перемещать очень ровно и осторожно, так как при использовании длинного лезвия легко возникают вибрации, препятствующие получению хороших срезов. Контактные поверхности должны содержаться в безупречной чистоте от пыли и смазываться равными частями оливкового и касторового масел. Имеется несколько держателей объектов, которые можно снимать и заменять: один соединен с аппаратом эфирного спрея, другой подходит для фиксации объекта, залитого в парафин, а третий — для захвата объекта, залитого в целлоидин. При использовании целлоидина необходимо применять специально длинный нож, который должен быть закреплен в зажиме очень косо. Держатель объекта поднимается с помощью точного винта, приводимого в действие большим латунным зубчатым колесом. Имеется храповое устройство, с помощью которого объект может автоматически подниматься на любое желаемое расстояние после каждого движения ножа. Он дает наиболее удовлетворительные результаты при работе с целлоидином и парафином. (Агентами являются господа Р. и Дж. Бек). Его стоимость составляет около 5 фунтов стерлингов.

Микротом Беккера изготовлен по тем же принципам, что и Шанце. Модификации заключаются в том, что каретка скользит по стеклянным пластинам вместо железных, и вместо того, чтобы вся поверхность каретки контактировала с пластинами, имеются лишь несколько гладких кнопок из слоновой кости. Таким образом, трение сводится к минимуму, и можно получить очень равномерные срезы. Цена такая же, как у Шанце.

Фрейзер представил «студенческий санный микротом» по тому же принципу, что и Шанце, который стоит около 3 фунтов стерлингов.

Кембриджский качающийся микротом. — Этот инструмент, изготовленный Кембриджской компанией научных инструментов или в слегка модифицированной форме господами Свифт (рис. 8), является лучшим прибором для нарезки срезов мелких объектов, залитых в парафин. С его помощью можно получать ленты серийных срезов с большей легкостью и уверенностью, чем с другими микротомами. Этот микротом отличается от ранее описанных тем, что нож неподвижен, а объект подвижен. Микротом состоит из продолговатой тяжелой металлической подставки. Длинный рычаг устроен так, что он качается на двух прочных вертикальных стойках, поднимающихся из рамы. Один конец этого рычага полый и принимает деревянный брусок с тканью, залитой в парафин, который прочно зажимается на месте. Этот конец опускается с помощью сильной спиральной пружины. Чтобы поднять его, предусмотрено устройство, с помощью которого другой конец рычага опускается шнуром, вращающимся вокруг шкива. Когда ручка поворачивается, ткань поднимается, а когда шнур ослабляется, пружина тянет ткань прочно и ровно вниз. Бритва, которая должна иметь прямое лезвие, прочно закрепляется винтами лезвием вверх на конце микротома. Затем объект регулируется так, чтобы при его опускании бритва срезала тонкий слой. Существует остроумное устройство, с помощью которого опускание рычага для подъема среза продвигает его немного дальше в направлении бритвы. Расстояние можно регулировать от 1/500 до 1/3000 дюйма. Таким образом, фактическая работа машины очень проста. После того как положение блока с тканью, подлежащей нарезке, отрегулировано так, чтобы бритва едва касалась ее, свободный конец опускается с помощью шкива. Это также продвигает срез немного дальше бритвы. Затем сильная пружина ровно тянет ткань мимо лезвия бритвы, и тонкий срез остается на лезвии. Его можно сразу перенести на предметное стекло, или, если парафин имеет надлежащую консистенцию, можно сделать еще один срез, при этом два среза должны слипнуться краями, и таким образом, повторяя движение, можно получить непрерывную ленту. Если возникают трудности с получением хорошей ленты, их обычно можно преодолеть, взяв немного мягкого парафина и прикрепив его с помощью горячей иглы к нижнему концу парафинового блока. Стоимость инструмента составляет около 5 фунтов стерлингов.

Рис. 8. — Модификация кембриджского качающегося микротома по Свифту.

Свежие срезы. — Хотя они не столь удовлетворительны, как фиксированные образцы для точной гистологической работы, их часто очень полезно изготавливать как в секционной, где требуется немедленное заключение о природе опухоли или больного органа, так и в операционной. При небольшой практике срезы можно нарезать, окрасить и смонтировать в течение десяти минут после извлечения образца из организма. Таким образом, оперирующему хирургу может быть предоставлена важная информация, и нередко это приводило к полному изменению предполагаемого лечения. Так, в одном случае предполагаемый хронический периостит оказался саркомой, и конечность была ампутирована. В другом случае предполагаемая саркома бедра оказалась гуммой, когда часть ее была удалена и исследована микроскопически.

Часть образца следует поместить без какой-либо подготовки на цинковую пластину микротома для замораживания и обмазать вокруг гуммиарабиком. Затем его замораживают. Сыворотка в тканях не находится в достаточном количестве, чтобы повредить нож при замораживании. Нож следует смочить, а срезы переносить либо в перикардиальную сыворотку, либо в 3/4-процентный раствор (70 гран на пинту) поваренной соли, ни один из которых не вызывает набухания клеток, как это делает обычная вода. Их следует осторожно расправить на предметном стекле — операция, требующая гораздо большего терпения, чем в случае с фиксированными срезами, так как свежие срезы менее когерентны, а также более липкие, из-за чего края стремятся свернуться на ноже и т. д. Затем их следует исследовать: один неокрашенным, просто смонтированным в солевом растворе; другой окрашенным пикрокармином и исследованным в солевом растворе; и третий окрашенным пикрокармином, смонтированным в растворе Фарранта и законсервированным. Последний обычно дает наилучшие результаты, окрашивание пикрокармином становится совершенно ярким через неделю. Глицерин, однако, имеет тенденцию вызывать значительную усадку срезов, а вес покровного стекла стремится разрушить нефиксированный срез.

ГЛАВА IV.

Монтаж срезов.

1. Методом флотации.

При этом методе срез, окрашенный или неокрашенный, помещают в чашку с водой или нормальным солевым раствором (стр. 53). Затем чистое предметное стекло вводят в воду под углом около 60°, при этом чуть более половины его длины погружается. Затем срез подносят иглой и максимально расправляют на стекле. Один угол фиксируют иглой, и при осторожном извлечении стекла срез должен лежать ровно. Если остались складки, не следует пытаться разгладить их иглой, а стекло нужно снова погрузить в воду до тех пор, пока сложенная часть среза не окажется под водой. Затем его следует осторожно извлечь, после чего складка исчезнет. Этот маневр необходимо повторять в разных направлениях, пока срез не ляжет на стекло совершенно ровно. Окрашенные и неокрашенные срезы расправляют таким образом перед монтажом в среде Фарранта, а неокрашенные срезы — перед окрашиванием пикрокармином.