d. Координацию с принимающей лабораторией следует проводить для установления требований к пробам, предпочтительных методов сбора, методов консервации и условий транспортировки, когда это позволяет тактическая ситуация и/или миссия.
e. Количество медицинских образцов, которые необходимо собрать, варьируется в зависимости от типа проводимого анализа и влияния определяемых значений. Количество и типы «контрольных» проб/образцов, необходимых для проверки информации тестирования, определяются персоналом поддерживающей медицинской лаборатории. По мере выявления потребностей будут применяться случайная выборка, сопоставление с контрольными группами населения или другие методы.
B-2. Справочная информация о пробе/образце
a. Полная история обстоятельств получения каждой пробы/образца должна быть предоставлена агентству, проводящему анализ.
b. Критическая информация включает, помимо прочего:
Метеорологические условия. Опишите, какими были метеорологические условия во время предполагаемой атаки и во время взятия пробы.
Время от атаки до сбора. Укажите промежуток времени после предполагаемой атаки, когда была взята проба/образец.
Обстоятельства получения. Опишите, как была получена проба/образец и источник пробы/образца.
Физическое описание. Опишите физическое состояние пробы/образца (твердое, жидкое, порошок, видимая вязкость), цвет, приблизительный размер, идентификацию пробы/образца (то есть грязь, листья, кровь, ткань) и мощность дозы (если радиоактивно загрязнена).
Обстоятельства применения агента. Опишите тип системы доставки, описание того, как функционировало оружие, как агент действовал при высвобождении, звуки, услышанные во время распространения, описание любых воронок или осколков, найденных в связи с разрывом, и цвета дыма, пламени или тумана, которые могут быть связаны с атакой.
Воздействие агента на растительность. Опишите общую местность (джунгли, горы, луга) и изменения в растительности после применения агента (то есть изменение цвета, увядание, высыхание, гибель) в основной зоне атаки и на периферии.
Воздействие агента на людей. Как агент повлиял на персонал в основной зоне атаки по сравнению с периферийными зонами; продолжительность воздействия агента; специфические запахи, которые могли быть замечены в районе до, во время или после атаки; меры, принятые для облегчения или усугубления последствий; и приблизительное количество жертв и выживших (включая возраст и пол).
Воздействие агента на животных. Опишите, как они пострадали.
Координаты сетки или другая описательная информация о месте сбора проб.
B-3. Сбор и консервация проб/образцов
a. Прижизненные образцы. Физиологические образцы от живых пациентов (людей или животных) могут включать практически любой мыслимый источник в организме или экскретируемый побочный продукт. Следует отметить, что типы образцов редко взаимозаменяемы; точный тип и количество образца, необходимые для конкретного анализа, должны быть известны до начала процедуры сбора (см. Таблицу B-1).
Пациенты, осмотренные в медицинском учреждении, могут быть первым, а в некоторых случаях и единственным источником для взятия проб при подозрении на высвобождение биологического агента. Первичный медицинский работник определит уровень лечения этих пациентов и образцы, необходимые для лабораторной диагностики. Лаборатория медицинского учреждения не оборудована для работы с биологическими агентами, поэтому полученные образцы будут направлены в поддерживающую медицинскую лабораторию для анализа. Распоряжение пациентами будет основываться на политике эвакуации, воздействии, подозреваемом агенте, клинических симптомах и необходимом лечении/изоляции.
Образцы крови представляют собой наиболее распространенную аналитическую пробу. Необходимо соблюдать определенные методы и особую осторожность, чтобы обеспечить сбор приемлемого образца и минимизировать неблагоприятное воздействие на пациента или сборщика образцов. В целом, для венепункции требуется использование иглы калибра 20–22 для минимизации механического гемолиза во время аспирации с использованием шприца или системы сбора Vacutainer™. Кровь, собранная шприцем и иглой, должна быть немедленно перенесена в соответствующую пробирку Vacutainer™ после сбора. Тип пробирки, тип антикоагулянта или консерванта и количество собранной крови будут варьироваться в зависимости от запрошенного конкретного анализа. Если не требуется специальный этап подготовки пробы, кровь лучше оставить в оригинальной пробирке с резиновой пробкой для транспортировки.
Образцы мочи лучше всего собирать с использованием техники «чистого сбора» (по возможности средней порции) в стерильный стаканчик для мочи. Объем необходимой пробы будет варьироваться в зависимости от запрошенного конкретного анализа; однако 25–50 мл достаточно для большинства тестов.
Образцы тканей могут происходить из любого источника в организме, доступного путем соскоба, мазка или небольшого иссечения. Образцы тканей собираются только специально обученным медицинским персоналом. Конкретные методы сбора этих образцов в данном приложении не приводятся.
Образцы мокроты лучше всего собирать с использованием стерильного стаканчика. Объем образца обычно будет очень малым. Однако необходимо собрать достаточное количество для проведения тестирования на театре военных действий и для тестирования в лаборатории на территории континентальной части США.
Назальные мазки следует собирать с использованием стерильных ватных тампонов. Тампоны с образцом от каждого человека следует помещать в отдельный стерильный контейнер для предотвращения перекрестного загрязнения.
ПРИМЕЧАНИЕ
В случаях, когда невозможно связаться с поддерживающей лабораторией, как минимум следует собрать следующие образцы: Моча — 25–50 мл в стерильном контейнере. Кровь — две пробирки по 7–10 мл без антикоагулянта (Vacutainer™ с красной крышкой); две пробирки по 7–10 мл с калиевой или натриевой солью этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) (Vacutainer™ с лавандовой крышкой).
Все образцы (независимо от физиологического источника) должны быть маркированы для однозначной идентификации человека или животного, у которого они были собраны; как минимум, на этикетке контейнера с образцом должны быть указаны полное имя человека, уникальный личный идентификационный номер (номер социального страхования, по возможности), воинская часть и местоположение, а также дата и время сбора.
Все образцы собираются с использованием асептических методов. Все образцы упаковываются, обрабатываются и транспортируются таким образом, чтобы они прибыли в конечную лабораторию назначения в пригодном для тестирования состоянии. При сборе или обработке образцов необходимо соблюдать правила личной защиты; как минимум, это включает перчатки и маску. В лаборатории также может потребоваться использование халата или других защитных предметов. В полевых условиях, при подозрении на условия ХБРЯЭ, сборщики должны находиться в экипировке уровня MOPP 4 или внутри защищенных от ХБРЯЭ транспортных средств. Здравый смысл, а также клиническая и/или тактическая ситуация определят степень необходимой личной защиты.
Консервация образцов, химическая или механическая (охлаждение), будет необходима для минимизации степени деградации аналита, которая происходит после извлечения образца из его физиологической микросреды. Оптимальный метод консервации будет варьироваться в зависимости от различных лабораторных тестов и должен быть подтвержден для каждого запрошенного анализа. Хотя замораживание может сохранить некоторые компоненты сыворотки, циклы замораживания-оттаивания могут денатурировать другие. Замораживание также может полностью уничтожить некоторые микроорганизмы. Это предостережение также относится к образцам тканей, поскольку «фиксация» ткани стандартным 10-процентным раствором формалина сохранит ткань для специальных методов окрашивания; однако это делает образцы совершенно бесполезными для микробиологического посева. Всегда проверяйте требования к консервации образцов для хранения и транспортировки в поддерживающей медицинской лаборатории перед обработкой образца. В идеале подтверждение правильных условий обращения должно быть согласовано до сбора.
Важность координации сбора проб/образцов с поддерживающей лабораторной базой невозможно переоценить. Свяжитесь с принимающей лабораторией для получения инструкций, если есть сомнения относительно соответствующего источника, метода сбора, условий хранения и консервации (например, аэробная или анаэробная среда) и требований к транспортировке проб/образцов. Чрезвычайно малые объемы проб/образцов, правильно собранные и обработанные, могут дать огромное количество информации для помощи в принятии медицинских, тактических и стратегических решений. И наоборот, очень большие количества плохо собранных и недостаточно законсервированных проб/образцов по сути бесполезны для большинства аналитических методов.
Анализ, выходящий за рамки возможностей на театре военных действий, будет координироваться поддерживающей лабораторией, при ее развертывании, или через медицинские каналы при отсутствии поддерживающей лаборатории на театре.
b. Посмертные и судебно-медицинские образцы. Анализ образцов от умерших людей и животных может предоставить ценную информацию о болезни, организмах, травмах или условиях окружающей среды во время смерти. Эта информация может значительно улучшить лечение других лиц, пострадавших от того же или физиологически схожего процесса. Сбор образцов для посмертного или судебно-медицинского исследования очень важен; используемые методы отражают значительную степень подготовки, опыта и навыков. Большинство образцов будут того же типа и размера, что и прижизненные образцы, но типы и количество образцов будут определяться сборщиком.
(1) Сбор образцов с останков должен проводиться исключительно патологоанатомом или другим персоналом, специально обученным методам судебно-медицинского сбора. Исключение составляют случаи, когда персонал Сил специальных операций (ССО) действует в условиях радиомолчания; наиболее квалифицированный медицинский работник в операции собирает, консервирует и транспортирует или координирует транспортировку образцов для оценки. Те же требования к цепочке поставок применяются к образцам, собранным персоналом ССО, как и ко всем другим образцам.
(2) Большой объем вспомогательной информации можно получить путем анализа места травмы и последующей смерти. Это расследование «места происшествия» требует огромного внимания к деталям и подготовленного наблюдателя. Если с судебно-медицинским персоналом невозможно связаться или его прибытие на место будет неоправданно задержано, следует сделать фотографии жертвы и ближайшего окружения. Объем и масштаб фотографий должны быть составлены так, чтобы отразить как можно больше деталей для помощи судебно-медицинскому персоналу в ретроспективном анализе места происшествия. В случае, если фотографирование невозможно, следует сделать подробные эскизы места происшествия для помощи судебно-медицинскому расследованию.
(3) Такие методы, как пункция сердца или мочевого пузыря, игольчатая биопсия органов, спинномозговая пункция или диагностическая лапаротомия, не должны выполняться неподготовленным персоналом, если это специально не запрошено и не предписано судебно-медицинскими следователями.
Таблица B-1. Сбор образцов при подозрении на агенты биологического оружия
EARLY POSTEXPOSURECLINICALCONVALESCENT/TERMINAL/POSTMORTEM
ANTHRAX 0 TO 24 HOURS.24 TO 72 HOURS.3 TO 10 DAYS. NASAL AND THROAT SWABS, AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR CULTURE, FA, AND PCR. SERUM (TT OR RT) FOR TOXIN ASSAYS. BLOOD (E, C, H) FOR PCR. BLOOD (BC OR C) FOR CULTURES. SERUM (TT OR RT) FOR TOXIN ASSAYS. BLOOD (BC OR C) FOR CULTURE. PATHOLOGY SPECIMENS.
PLAGUE 0 TO 24 HOURS.24 TO 72 HOURS.>6 DAYS. NASAL SWABS, SPUTUM, AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR CULTURE, FA, AND PCR. BLOOD (BC AND C) FOR CULTURE AND BLOODY SPUTUM (C) FOR FA. SERUM (TT OR RT) FOR F-1 ANTIGEN ASSAYS. BLOOD (E, C, OR H) FOR PCR. SERUM (TT OR RT) FOR IgM, LATER FOR IgG. PATHOLOGY SPECIMENS.
TULAREMIA 0 TO 24 HOURS.24 TO 72 HOURS.>6 DAYS. NASAL SWABS, SPUTUM, AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR CULTURE, FA, AND PCR. BLOOD (BC OR C) FOR CULTURE. BLOOD (E, C, OR H) FOR PCR. SPUTUM FOR FA AND PCR. SERUM (TT OR RT) FOR IgM AND LATER IgG, AGGLUTINATION TITERS. PATHOLOGY SPECIMENS.
MELIOIDOSIS/GLANDERS 0 TO 24 HOURS.24 TO 72 HOURS.>6 DAYS. NASAL SWABS, SPUTUM, AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR CULTURE AND PCR. BLOOD (BC OR C) FOR CULTURE. BLOOD (E, C, OR H) FOR PCR. SPUTUM AND DRAINAGE FROM SKIN LESIONS FOR PCR AND CULTURE. BLOOD (BC OR C) AND TISSUE FOR CULTURE. SERUM (TT OR RT) FOR IMMUNOASSAYS. PATHOLOGY SPECIMENS.
BRUCELLOSIS 0 TO 24 HOURS.24 TO 72 HOURS.>6 DAYS. NASAL SWABS, SPUTUM, AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR CULTURE AND PCR. BLOOD (BC OR C) FOR CULTURE. BLOOD (E, C, AND H) FOR PCR. BLOOD (BC OR C) AND TISSUE FOR CULTURE. SERUM (TT OR RT) FOR IMMUNOASSAYS. PATHOLOGY SPECIMENS.
Q FEVER 0 TO 24 HOURS.2 TO 5 DAYS.>6 DAYS. NASAL SWABS, SPUTUM, AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR CULTURE AND PCR. BLOOD (BC OR C) FOR CULTURE IN EGGS OR MOUSE INOCULATION. BLOOD (E, C, AND H) FOR PCR. BLOOD (BC OR C) FOR CULTURE IN EGGS OR MOUSE INOCULATION. PATHOLOGY SPECIMENS.
BOTULISM 0 TO 24 HOURS.24 TO 72 HOURS.>6 DAYS. NASAL SWABS AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR PCR (CONTAMINATING BACTERIAL DNA) AND TOXIN ASSAYS. SERUM (TT OR RT) FOR TOXIN ASSAYS. NASAL SWABS AND RESPIRATORY SECRETIONS FOR PCR (CONTAMINATING BACTERIAL DNA) AND TOXIN ASSAYS. USUALLY NO IgM OR IgG. PATHOLOGY SPECIMENS (LIVER AND SPLEEN FOR TOXIN DETECTION).
RICIN INTOXICATION 0 TO 24 HOURS.36 TO 48 HOURS.>6 DAYS. NASAL SWABS AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR PCR (CONTAMINATING CASTOR BEAN DNA) AND TOXIN ASSAYS. SERUM (TT OR RT) FOR TOXIN ASSAYS. SERUM (TT OR RT) FOR TOXIN ASSAY. TISSUE FOR IMMUNOHISTOLOGICAL STAINING. PATHOLOGY SPECIMENS. SERUM (TT OR RT) FOR IgM AND IgG IN SURVIVORS.
STAPH ENTEROTOXICOSIS 0 TO 3 HOURS.2 TO 6 HOURS.>6 DAYS. NASAL SWABS AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR PCR (CONTAMINATING BACTERIAL DNA) AND TOXIN ASSAYS. SERUM (TT OR RT) FOR TOXIN ASSAYS. URINE FOR IMMUNOASSAYS. NASAL SWABS AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR PCR (CONTAMINATING BACTERIAL DNA) AND TOXIN ASSAYS. SERUM (TT OR RT) FOR TOXIN ASSAYS. SERUM FOR IgM AND IgG.
T-2 TOXICOSIS 0 TO 24 HOURS POSTEXPOSURE1 TO 5 DAYS.>6 DAYS POSTEXPOSURE. NASAL AND THROAT SWABS AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR IMMUNOASSAYS, HPLC/MASS SPECTROMETRY. SERUM (TT OR RT) AND TISSUE FOR TOXIN DETECTION. URINE FOR DETECTION OF TOXIN METABOLITES.
EQUINE ENCEPHALOMYELITIS (VEE, EEE, AND WEE VIRUSES)24 TO 72 HOURS.>6 DAYS. 0 TO 24 HOURS.
NASAL SWABS AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR RT-PCR AND VIRAL CULTURE. SERUM (TT OR RT) AND THROAT FOR CULTURE. SERUM (E, C, H, TT, OR RT) FOR RT-PCR. THROAT SWABS UP TO 5 DAYS FOR CULTURE THEN CSF. SERUM (TT OR RT) FOR ANTIGEN ELISA. SERUM (TT OR RT) FOR IgM. PATHOLOGY SPECIMENS PLUS BRAIN.
POX) (SMALLPOX AND MONKEYPOX)2 TO 5 DAYS.>6 DAYS. 0 TO 24 HOURS. NASAL SWABS AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR PCR AND VIRAL CULTURE. SERUM (TT OR RT) FOR VIRAL CULTURE. SERUM (TT OR RT) FOR VIRAL CULTURE. DRAINAGE FROM SKIN LESIONS/ SCRAPINGS FOR MICROSCOPY, EM, VIRAL CULTURE, AND PCR. PATHOLOGY SPECIMENS.
EBOLA 0 TO 24 HOURS.2 TO 5 DAYS.>6 DAYS. NASAL SWABS AND INDUCED RESPIRATORY SECRETIONS FOR RT-PCR AND VIRAL CULTURE. SERUM (TT OR RT) FOR VIRAL CULTURE. SERUM (TT OR RT) FOR VIRAL CULTURE. PATHOLOGY SPECIMENS PLUS ADRENAL GLAND.
LEGEND:
BCBlood culture CCitrated blood CSFcerebrospinal fluid DNAdeoxyribonucleic acid EEDTA EEEeastern equine encephalitis ELISAenzyme-linked immunosorbent assay
EMelectron microscopy F-1fraction-1 FAfluorescent antibody HHeparin HPLChigh-pressure liquid chromatography IgGimmunoglobulin class G IgMimmunoglobulin class M
PCRpolymerase chain reaction RTRed Top, if TT is not available RT-PCRreverse transcriptase/ polymerase chain reaction TTTiger top VEEVenezuelan equine encephalitis WEEwestern equine encephalitis
c. Сбор проб воды.
(1) Пробы воды для идентификации или подтверждения загрязнения биологическими агентами собираются персоналом профилактической медицины. Поддерживающая лаборатория должна предоставить руководство по процедурам отбора проб и наборам для сбора проб. При отсутствии руководства метод использования Sep-Pak™ описан в FM 3-19.
(2) Когда наборы для отбора проб недоступны, пробы могут быть собраны в другие доступные стерильные контейнеры. Лучшими контейнерами для использования являются стеклянные бутылки объемом 100 мл, используемые для сбора рутинных проб воды. Все пробы воды должны быть собраны и помещены в холодильник или охладитель до тех пор, пока проба не будет транспортирована к месту назначения. Во время транспортировки пробы должны поддерживаться при температуре от 1°C до 4°C.
d. Пробы пищевых продуктов. Ветеринарный персонал должен собирать пробы пищевых продуктов при подозрении на биологическое загрязнение для направления в поддерживающую лабораторию для подтверждения загрязнения на театре военных действий. Все пробы пищевых продуктов должны быть собраны и помещены в стерильные контейнеры. Поместите пробы в холодильник или охладитель до тех пор, пока проба не будет транспортирована к месту назначения. Во время транспортировки пробы должны поддерживаться при температуре от 1°C до 4°C.
e. Образцы от животных. Ветеринарный персонал собирает образцы от животных при подозрении на биологическое загрязнение/заболевание. Те же типы и количества образцов подготавливаются и отправляются таким же образом, как и образцы от людей.
f. Пробы окружающей среды. Пробы окружающей среды собираются в соответствии с указаниями в руководстве оператора или других публикациях по эксплуатации систем сбора. Пример: Биологическая интегрированная система обнаружения (BIDS) собирает пробу окружающей среды с помощью коллектора одиночных жидких проб. Коллектор представляет собой высокопроизводительное устройство для отбора и сбора аэрозольных проб. По требованию оно отбирает пробы окружающего воздуха через двухступенчатый виртуальный импактор, который концентрирует аэрозольные частицы в диапазоне диаметров от 2 до 10 микрометров. Поток концентрированных частиц направляется через влажный коллектор, содержащий буферный раствор, и в течение 45 минут собирается проба объемом 40–50 мл. По приказу или когда результаты теста указывают на подозреваемый агент, проба и сопутствующая документация упаковываются и транспортируются в соответствии с FM 3-101-4.